摘 要

对银杏—杜仲叶复合中药固态发酵物中总黄酮和绿原酸的超声波提取条件进行了系统的研究，在超声波功率500W的条件下，选择固液比、乙醇浓度、提取温度和提取时间进行单因素试验；在单因素试验的基础上，采用L₉（3⁴）正交试验结果表明，总黄酮和绿原酸的最佳提取工艺为：固液比1：15，乙醇浓度70%，温度50℃，时间为20min。在此条件下，连续提取2次，总黄酮和绿原酸的提取率分别达到1.838%、0.497%，与乙醇回流提取工艺相比，相对提取率均达到95%以上。

关键词: 银杏—杜仲叶；总黄酮；绿原酸；超声波

Optimization of Ultrasonic-assisted Extraction of Active Ingredients from Fermented Ginkgo-Eucommia Leaves

Abstract

In this research, the ultrasonic extraction conditions of total flavonoids and chlorogenic acid from solid state fermented Gingko and Eucommia ulmoides leaves were studied systematically. When ultrasonic power was 500W, the single factor experiment was carried out by choosing the ratio of solid to liquid, ethanol concentration, extraction temperature and extraction time. On the basis of single factor test, the optimum extraction process of total flavonoids and chlorogenic acid was that as follows: solid liquid ratio of 1:15, 70% of ethanol, temperature 50^oC, 20min. Under the condition, the extraction rate of total flavonoids and chlorogenic acid was 1.838% and 0.497% respectively, and the relative extraction rate was more than 95%.

Keywords: Ginkgo - eucommia leaves; Total flavonoids; Chlorogenic acid; Ultrasonic extraction

目 录

前 言 1

1文献综述 2

1.1 微生物对中药的发酵转化 2

1.2中药对微生物的协同增效 2

1.3 微生物中药发酵的作用机理 3

1.3.1 促进中药中有效成分的析出，增强疗效 3

1.3.2 降低中药的毒性和副作用 3

1.4 发酵产物生物活性成份提取、分离与检测方法 4

1.4.1 提取、分离 4

1.4.2 纯化 5

1.4.3 分析方法 5

2 材料与方法 6

2.1材料与仪器 6

2.1.1试验材料 6

2.1.2试验试剂 6

2.1.3试验仪器 7

2.2试验方法 7

2.2.1有效活性物质提取流程 7

2.2.2总黄酮含量的测定 7

2.2.3绿原酸含量的测定 8

2.2.4 总黄酮、绿原酸的提取 8

2.2.5总黄酮、绿原酸的测定及含量计算 8

3试验结果 9

3.1单因素试验 9

3.1.1固液比对有效物质提取率的影响 9

3.1.2有机溶解浓度对有效物质提取率的影响 9

3.1.3温度对有效物质提取率的影响 10

3.1.4提取时间有效物质提取率的影响 10

3.2正交试验 11

3.3超声波辅助提取与常规提取效果比较 12

4讨论 13

5小结 13

致 谢 13

参考文献： 14

前 言

银杏(Ginkgo biloba)，又名白果、鸭脚等，是我国古老树种，具有较高药用价值^[1]。银杏叶具有味甘、苦、涩，性平，归心、肺经，具有敛肺，平喘，活血化瘀，止痛的功效，主用于肺虚喘咳，冠心病，心绞痛，高血脂症的治疗。银杏叶中主要的化学成分有萜内酯、黄酮、聚异戊烯醇、酚酸等，其中黄酮和萜内酯类成分具有很强的药理活性^[2]。

杜仲 (Eucommia ulmoides Oliv )是中国特有的名贵经济树种，落叶乔木。20世纪50年代以来，国内外学者已从杜仲皮、叶、花和果实中提取获得化学成分多达134种^[3]。按其结构分为木脂素类、环烯醚萜类、黄酮类、苯丙素类、甾醇类及三萜类、多糖类、抗真菌蛋白和矿物元素等^[4]。杜仲具有降压作用、降血脂作用、降血糖作用、抗肿瘤作用、抗菌抗病毒作用、抗炎、抗氧化作用、保肝护肾、抗骨质疏松作用，另外还有抗心血管重塑、神经保护、免疫调节、镇静催眠、增加胃液和胆汁的分泌、松弛子宫平滑肌和改善勃起功能^[5-6]。而且杜仲叶具有与杜仲皮同等的功能成份。杜仲叶具有补肝肾、强筋骨等功能，用于治疗肝肾不足、头晕目眩、腰膝酸痛、筋骨痿软等症^[7]。现代药理研究表明杜仲叶具有抗高血压、降血脂、抗糖尿病、抗氧化、抗肥胖、改善骨质代谢及增强免疫功能等作用^[8]。银杏-杜仲叶复合中药固态发酵物具有丰富的营养成份，有效活性成份作用增强，纤维素、半纤维素含量降低，风味和适口性较好。在禽畜养殖、水产养殖业中作为中药添加剂，可以有效提升动物免疫力，提高饵料转化率，具有较好的应用前景，同时可作为有效活性成份提取的原料。

早在四千多年以前，我国就开始利用微生物发酵来酿酒，其后又利用微生物发酵生产酱、醋和豆豉等食品。中药中的六神曲、淡豆豉、半夏曲等均是利用自然界微生物（如霉菌、酵母等）发酵而成。《神农本草经》中有用真菌发酵灵芝、茯苓、猪苓、雷丸等的记载。这些炮制方法现在仍被广泛应用，有些还融入了现代科学技术因素。

现代微生物发酵是指经精制或处理后的中药，在一定的温度和湿度条件下，在真菌、细菌等微生物的作用下催化分解，使药物发泡、生衣^[9]，经发酵法炮制后的药材改变了部分性能，产生了新的治疗效果。

黄酮和绿原酸常见的提取方法有：超滤法、有机溶剂提取法、超临界流体萃取法、超声波辅助提取法、微波法、高速逆流色谱法等^[10-11]。采用超声波与有机溶剂提取相结合的超声波辅助提取法在提取时间、溶剂用量和设备成本方面具有优势。其原理主要是利用超声波产生的强烈振动、高的加速度、强烈的空化效应、搅拌作用等，加速药物有效成份的溶解，缩短提取时间，提高提取效率^[12]。

1文献综述

1.1 微生物对中药的发酵转化

目前用于中药发酵的微生物主要有乳酸菌、酵母菌、黄曲霉菌、芽胞杆菌、红曲霉、双歧杆菌、黑曲霉以及各种药用真菌等。在中药发酵过程中，微生物可以分解、转化中药中的纤维、糖类、蛋白质等成分，使中药细胞破壁，促进有效成分溶出，且微生物在生长代谢过程中产生的一些代谢产物可以改变中药的活性成分，增强药效，扩大适用症状。黄达明等^[13]采用猴头菌对银杏叶粗提物发酵，结果显示，发酵液能显著降低糖尿病小鼠的血糖水平，降低血清甘油三酯和胆固醇的含量，具有较好的降血糖和降血脂作用。韩春杨等^[14]对黄芪、党参、茯苓和白术等组成的中药制剂发酵并进行肉鸡饲喂实验，结果显示，中药发酵制剂组对抗新城疫病毒的抗体效价、免疫器官指数等指标均高于对照组，差异显著（plt;0.05），且饲料利用率比对照组明显提高。