摘 要

：本文采用L₁₆(4⁵)正交试验设计，建立了适合银杏SSR分析的PCR体系：在50μL反应体系中，添加10×buffer(Mg² free)5μL, TaqDNA聚合酶1 U, dNTPs0.1 mmol·L-1,引物0.4μmol·L-1, MgCl₂2 mmol·L-1,模板DNA30ng。在此体系的基础上，利用多态性较丰富的4对SSR引物对6个银杏品种进行指纹图谱分析，并构建了相应的指纹数据，实现了这6份材料的分子鉴定。

关键词： 银杏；SSR分子标记；指纹图谱

Construction of SSR Fingerprints of Ginkgo biloba

Abstract: In this paper, a appropriate SSR-PCR system for ginkgo has been established by L₁₆ (4⁵) orthogonal experimental design.It was: in 50μL reaction system, adding 10 × buffer (Mg² free) 5μL, TaqDNA polymerase 1U, dNTPs0.1 mmol.L ^-1, primer 0.4μmol .L^-1, MgCl₂ 2mmol . L^-1, template DNA30ng. using this system,Fingerprint of six varieties of ginkgo was constructed by four pairs of polymorphic SSR primer. and the corresponding fingerprint data was building.

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Key words: Ginkgo biloba；SSR makers；Fingerprint

目 录

前 言 4

1 文献综述 4

1.1遗传标记的种类及特征.....................................................................................................4

1.1.1 形态标记.......................................................................................................................4

1.1.2细胞学标记....................................................................................................................5

1.1.3 生化标记.......................................................................................................................5

1.1.4 分子标记.......................................................................................................................5

1.2 SSR标记 ........6

1.2.1 SSR标记的原理 .6

1.2.2 SSR标记的类型 ..6

1.2. 3 SSR标记技术的特点..................................................................................................6

1.2. 4 SSR的功能.................................................................................................................6

1.3 SSR标记在植物育种研究中的应用 7

1.3.1亲缘关系和遗传多样性的研究……………………………………………………...7

1.3.2 种质资源保存和利用……………………………………………………………….7

1.3.3基因定位及分子标记辅助育种……………………………………………………..8

2材料与方法 8

2.1 实验材料............................................................................................................................9

2.2 实验试剂 9

2.3 实验方法..........................................................................................................................9

2.3.1 DNA的提取 .9

2.3.2 SSR-PCR反应体系建立.......................................................................................................10

2.3.3 SSR-PCR扩增 ........10

2.3.4扩增产物的电泳分析和染色 .10

2.3.5 条带的统计和分析...............................................................................................................10

3 结果与分析 10

3.1 DNA的提取.......................................................................................................................................10

3.2 SSR-PCR反应体系的建立...........................................................................................................11

3.3引物的筛选.......................................................................................................................................11

3.4 指纹图谱分析..................................................................................................................................11

4.结论与讨论 .12

致 谢 14

参考文献： 15

前 言

银杏是一种原产我国的重要经济树种，生命周期长,并长期通过无性方式进行繁殖,由于不同地域间的相互引种,使得同名异物和同物异名现象十分普遍。如何准确地对现有银杏品种进行鉴定和分类,是进一步科学有效地利用银杏资源的基础。过去人们对品种的分类和鉴定主要采用比较植物学特征并结合细胞学、胞粉学和酶学等方法,但存在一定的局限性，对关系较近的材料不能准确区分。近10多年来发展起来的DNA分子标记技术为品种鉴定与分类开辟了广阔的空间。它是在DNA水平上对遗传多态性的直接放映，不受表现型和环境的影响。SSR标记与其他标记相比实验方便现象明显，不失为绘制品种指纹图谱的强有力工具,本研究利用4对SSR引物初步构建了6个银杏品种的指纹图谱，以期为这6个银杏品种的准确的鉴定与分类提供依据。

1 文献综述

1.1 遗传标记的种类及特征

1.1.1　形态标记

　形态标记主要是以植物的外部特征,如株高、穗长、粒色、花色、粒重等性状作为遗传研究的标记。从广义上面来讲,形态标记也包括与色素、生殖生理特性、抗病抗虫性等有关的标记。其具有直观、简便、易行、快速的特点,结合野外调查、标本采集、移栽和子代测定等手段,采用严密的数量遗传学分析方法,可以在短期内对所研究物种的遗传变异水平产生一个基本的认识。同时,形态标记结合主成分分析,也是种质遗传多样性评价和优良种质筛选的一种重要手段。但由于表现型和基因型之间存在着基因表达、调控和个体发育等复杂的中间环节,如何根据表现型差异来反映基因型差异,成为用表现型性状检测遗传多样性的关键所在。此外,形态标记数量少、多态性差而且易受环境条件影响,因此,用表现型性状差异来研究植物遗传多样性有很大的不确定性与局限性。