摘 要

由于重瓣铁线莲雄蕊全部成花瓣状，无法按常规的方式产生种子用于播种，而压条扦插等无性繁殖方式繁育种苗的繁殖系数很低，为此，国内外现在越来越多人开始着重于其组织培养和体胚发生，从而达到快速繁殖成苗的目的。本文主要对重瓣铁线莲茎段和顶芽的组织培养与体胚发生展开相关研究，以期为加快重瓣铁线莲繁殖速度，扩大繁殖规模，进一步推动该品种的实际应用提供帮助。

本文探讨重瓣铁线莲茎段及顶芽组织培养与体胚发生过程中所需的培养基配方以及培养方法。结果如下：茎段合适灭菌方案为：0.1%升汞8min较适增殖培养条件：1/2MS NAA 0.03mg/L 6-BA0.5 mg/L；诱导体胚发生培养条件：1/2MS 2,4-D1.0 mg/L 6-BA0.5 mg/L 肌醇100 mg/L 水解酪蛋白200 mg/L Vc 5 mg/L。

关键词：重瓣铁线莲 组织培养 体胚发生

Abstract：Because of Clematis florida var. plena’s petal-like stamens, we couldn’t use normal reproductive methods, such as raising seedling, steckling and so on, its low propagation coefficient also lead to the situation mentioned above. So more and more people begin to focus on tissue culture and somatic embryogenesis, to achieve the purpose of rapid propagation. The points of this article are the research of tissue culture and somatic embryogenesis that about stems and terminal buds of Clematis florida var. plena, hoping that they can help the reproductive speed, even promoting this product to be applied in the world

Through series of experiments with analysis and comparison, the medium formula, training environment and training methods were established for culture and somatic embryogenesis with stem and terminal bud from Clematis florida var. plena’s. The results were as follows: The more suitable sterilization program for stems was 0.1％HgCl₂ solution in 5min. The more suitable medium for proliferation was 1/2MS NAA 0.03mg/L 6-BA0.5mg/L. The more suitable medium for somatic embryogenesis was1/2MS 2,4-D 1.0 mg/L 6-BA0.5 mg/L Myinositol 100mg/L CH 200mg/L Vc 5mg/L

Key words: Clematis florida var. plena; tissue culture; somatic embryogenesis.

前言 1

1 铁线莲简介及研究概况 2

1.1 铁线莲属植物的概况 2

1.2 铁线莲属研究现状 2

1.2.1分类研究 2

1.2.2 化学成分利用 3

1.2.3我国铁线莲种质资源与引种栽培 3

1.2.4 繁殖 3

1.2.5 园林应用 3

2 组织培养与体胚发生研究进展 4

2.1 组织培养概述 4

2.2 组织培养研究进展 4

2.2.1 植物组织培养的方法 4

2.2.2 植物组织培养中常出现的问题及解决方法 5

2.2.2.1 遗传稳定性问题 5

2.2.2.2 玻璃化苗问题 5

2.2.2.3 污染问题 6

2.3 体胚发生概述 6

2.4 体胚发生研究进展 6

2.4.1 基因 6

2.4.2 外植体 7

2.4.3 培养基 7

2.3.4 培养条件 7

2.4.5 激素 7

3 铁线莲属植物的组织培养和体胚发生 8

4 材料与方法 8

4.1材料 8

4.2方法 8

4.2.1 外植体灭菌和选择 8

4.2.2 基本培养基的筛选 9

4.2.3 增殖培养基的选择 9

4.2.4 体胚发生培养基的选择 10

5 结果与分析 10

5.1 外植体的选择以及灭菌时间的确定 10

5.2 基本培养基的筛选 11

5.3 增殖培养 11

5.5 体胚发生 13

6 讨论 15

6.1 结论 15

6.2 讨论 15

6.2.1 与相关实验的对比 15

6.2.1.1 增殖培养不同实验对比 15

6.2.1.2 体胚发生不同实验对比 15

6.2.2外植体最佳灭菌时间的确定 16

6.2.3 玻璃化苗 16

6.2.4材料褐变 16

6.2.4.1 褐变原因及危害 16

6.2.4.2 褐变产生的影响因素 17

6.2.4.3 防止外植体产生褐变的对策 17

参考文献 18

致 谢 20

前言

铁线莲属(Clematis)植物是常见的园艺栽培植物，为多年生毛茛科木质藤本，无花瓣，萼片花瓣状，大且色彩丰富,在垂直绿化中具有重要作用。重瓣铁线莲（Clematis florida var. plena）属于毛茛科(Ranunculaceae)铁线莲属植物，由于其适应性强，抗旱耐寒，成为现代园林中进行垂直绿化的优良植材。在园林中应用广泛，多用于花篱、花架、拱门、绿浪等园林小品装饰。盆栽可布置阳台、窗台和室内盆架，或者悬挂栽培^[1]。尽管国内对于毛茛科铁线莲属的研究较多，但绝大部分是针对铁线莲属植物的药用价值或对其资源的调查,而对于国外铁线莲的引种栽培及其在园林上的应用研究较少。

然而由于其雄蕊全部成花瓣状，无法按常规的方式产生种子用于播种，而压条扦插等无性繁殖方式繁育种苗的繁殖系数很低，国内外现在越来越多人开始着重于其组织培养和体胚发生，从而达到快速繁殖成苗的目的。目前，欧洲已经建立起初步的快繁体系，我国在相关方面的研究也在进行中。本文就是基于国内外研究的基础之上，通过一系列的实验以及针对实验进行分析，试图找出重瓣铁线莲快速繁殖中组织培养以及体胚发生过程中所需要的最佳条件，从而扩大该植物的繁殖，使其园林价值，药用价值等能更好的得到利用。1 铁线莲简介及研究概况

1.1 铁线莲属植物的概况

铁线莲属植物属于毛茛科，为常绿或落叶攀援灌木，罕直立灌木或宿根草本。叶对生，叶柄长，单叶、三出复叶或羽状复叶，全缘、具锯齿或分裂，聚伞、总状或圆锥花序，稀单生，多为两性花，无花瓣，萼片大、花瓣状，色彩丰富，4~8枚，雄蕊多数，心皮多数、离生，瘦果；通常有宿存羽毛状花柱，花期6~8月，果期8~10月^[1]。铁线莲属植物广泛分布于世界各地，全球约有300多种，我国约有140多种，各地分布均匀，尤以华中和西南地区分布居多。观赏价值高，可点缀于围墙、栅栏、棚架或作绿篱，也可以在假山或岩石园中配置，彰显独特风格。除有极高的景观价值外，还有较高的经济价值和药用价值。