摘 要

本论文主要介绍以组织培养的方法对小佛肚竹进行丛芽生长，并筛选出适合小佛肚竹的培养条件，为实际生产提供参考。实验材料为小佛肚竹，以新生的嫩芽作外植体，用不同激素配比对其进行丛芽培养，并观察生长情况。同时在必要时进行继代培养，最后筛选出最适合生长的培养基配方，通过观察，适合小佛肚竹的培养条件为MS BA 5mg/L NAA 0.1mg/L.

【关键词】 组织培养；观赏竹；培养基

Abstract

This paper introduces the method of tissue culture to the small Buddha belly bamboo cluster bud growth, and screened for small Buddha belly bamboo culture conditions, provide a reference for the actual production. Experimental materials for small Buddha belly bamboo to new buds as explants, different groups of hormones with its buds in different culture media, and to observe the growth, while necessary, subculture, the final selection the most suitable for growth of the culture medium, through observation, suitable for small Buddha belly bamboo cultivation conditions for MS BA 5mg / L NAA 0.1mg / L.

Key words: tissue culture; ornamental bamboo; culture medium

目录

摘 要 2

Abstract 2

前言 4

国内外研究现状 9

实验材料与方法 9

实验器具与材料 9

方法 10

结果与分析 13

讨论与结论 18

参考文献 19

后记 20

1前言

竹类很少有有性繁殖，而传统的无性繁殖方法所需种源较多，种苗运输不便、劳动强度大、繁殖系数低等问题，而且竹类植物开花间隔期长,许多竹种的开花具不可预测性,种子的获取十分困难。与之相比,组织培养育苗具有繁殖速度快,增殖系数高,花费少之优点，因此，利用现代生物技术对观赏竹的快速繁殖技术，促进新造林用种良种化，改进我国竹类的遗产品质是当前探索竹子育种新途径的重要任务。

目前竹类植物抗性育种的研究日益受到人们关注，而竹类植物的分子生物学研究严重滞后于禾本科的农作物，有关生物技术育种的基础研究相对薄弱。植物组织培养则是进行抗性育种研究的重要前提工作。

植物组织培养概念（广义）又叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织.器官或细胞，原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。 植物组织培养概念（狭义）指用植物各部分组织，如形成层.薄壁组织.叶肉组织.胚乳等进行培养获得再生植株，也指在培养过程中从各器官上产生愈伤组织的培养，愈伤组织再经过再分化形成再生植物。

1.1组织培养的主要内容

1.1.1植物组织培养的理论依据

植物组织培养的核心理论依据是植物细胞的全能性。植物细胞的全能性是指植物的每个细胞都具有该植物的全部遗传信息，在一定培养条件下离体细胞具有发育成完整植株的潜在能力。用于发生无性繁殖系的组织块或细胞团叫做外植体。植物组织培养是二十世纪初发展起来的基于细胞全能性理论的一门新技术，涉及到细胞、分子、形态、解剖、生理、生化、发育、病理、遗传育种等多学科领域的知识

1.1.2准备内容

主要包括培养基母液的制备、混合、加热、分装、灭菌。母液是植物生长所需要矿质元素的浓缩液，在配制母液的时候，应考虑药品溶解的先后顺序来避免化学药品溶解时产生沉淀。分装是将加热后的溶液分别灌装在培养瓶中，应注意在分装时溶液不能沾留在培养瓶口上，以避免杂菌污染。灭菌是对培养基进行高压灭菌，防止污染，应掌握灭菌高压锅的使用。

1.1.3快速繁殖

做好准备工作后就开始真正的组织培养。竹类作为培养材料时，选取枝条要刚停止生长的，枝稍展叶3-7片，基部枝箕枯黄或者开始剥落，未萌侧芽或刚萌侧芽作为外植体。用75%的酒精和0.1%升汞作为表面消毒剂，处理时间分别为15-30s和5-10min。接种好外植体的试管，置于有光照的培养箱或培养室中，每天光照12-14h，光照强度1500-3000lx。培养室温度为25-27℃。

到继代增殖培养时，植物器官在离体的条件下，细胞要经过脱分化、再分化等一系列的过程，最终发育成完整植株。在此期间，应该认真观察培养材料的外部变化、生长状况以及微小的细胞变化情况，并及时做好记录。

1.1.4出瓶栽培管理

试管苗经过壮苗、生根、驯化培养后就可以移栽到温室中了，这是从异养到自养的转变过程。一方面由于组培苗一般根毛发育极差，根系对土壤的附着、吸水能力比较差；另一方面，试管苗长期生活在培养瓶内，叶片海绵细胞层增加而栅栏组织变差，气孔发育差且开关能力低下，因此组织培养幼苗在移栽入土后极易失水死亡。移植前将试管打开瓶盖，置于自然光照下1-4d，取出试管苗，用自来水冲去培养基，再用0.1%代森锌浸根3-6min，移植到装有用泥炭土、珍珠岩、蛭石等按一定比例配制而成的培养土的容器中，浇足水分。

为了提高苗的成活率，应从提高组织培养苗根系质量、移栽质量，移栽前根系处理，和移苗后温度、湿度控制等方面去考虑。

1.2组培过程中常见问题及处理方法

1.2.1 污染

污染是指在组织培养过程中由于微生物（包括细菌、放线菌、酵母菌、霉菌病毒等）的存在，使培养物生长受到影响或死亡的现象。造成污染的原因可能有工作环境、培养基、器皿以及外植体灭菌不彻底、无菌操作不规范合理等。

针对这些造成的原因，我们采取对症下药：

1. 对培养基进行彻底灭菌

事先用洗衣粉清洗组培瓶，然后用自来水或蒸馏水冲洗干净。然后用高压灭菌锅灭菌，高压蒸气灭菌是培养基灭菌时常用的方法，也是植物组培的重要操作技术，直接关系到接种的成败。

高压蒸气灭菌的原理：水蒸气的温度是随着压力的增加而逐渐升高的，所以灭菌用的高压蒸汽都是通过加压获得的。而空气的热胀系数比水蒸气大，如果灭菌锅内的空气不能完全排除，那么即使灭菌锅内的压力表反映出锅内的压强单位，但有空气在，灭菌锅内也无法达到灭菌所需的温度。有实验显示，如果锅内的空气只排除一半，当压力表指针达到0.105MPa时，锅内的实际温度只能达到112℃，比要求的低9℃，这将导致灭菌不彻底而造成培养基的大量污染，所以高压灭菌锅的使用关键是设法排净锅内的空气。

具体操作方法：将分装好的培养基放入高压蒸气锅内121℃，保持20min以上，可完全杀死物品内外的微生物、芽孢和孢子，然后将灭过菌的培养基放在组培室或相对无菌的环境中，冷却后待用。用高压锅进行灭菌应注意：检查高压锅的安全性；在高压锅内加水不可过多或过少；要将灭菌物用牛皮纸包好，以防棉塞被锅内的冷凝水滴湿从而被空气污染等。

1. 保持接种室的无菌环境

无菌室经常用药物或紫外线进行灭菌。