摘 要

：本文采用SRAP-PCR的标准反应体系（50μL）：包含10×buffer( with Mg² )5μL, TaqDNA聚合酶（5U/μL）0.25μL, dNTPs（各2.5mM）4μL,引物（10μM）2μL,模板DNA2.5ng。对88对SRAP引物进行初筛和复筛，最后选出多态性较丰富的9对SRAP引物对45个银杏品种进行遗传多样性分析，结果表明：PCR产物共产生78个清晰位点，其中60条多态性位点，多态性位点百分率为76.92%；45份银杏品种的遗传相似系数范围是0.53-0.93，当遗传相似系数取0.67时，供试材料分为四大类。

关键词： 银杏；SRAP标记；遗传多样性

Genetic Diversity Analysis of Ginkgo biloba varieties by SRAP

Abstract: In this paper, a appropriate SRAP-PCR system for ginkgo has been designed.It was: in 50μL reaction system, adding 10 × buffer (with Mg² ) 5μL, TaqDNA polymerase 0.25μL, dNTPs4μL^, primer 2μL, template DNA2.5ng. 9 pairs of polymorphic SRAP primer were chosed by preliminary screening and the secondary screening from 88 pairs of primer on SRAP to analyse the genetic diversity of forty-five varieties of ginkgo. The results showed that 9 pairs of primers generated 78 clear bands, in which there were 60 polymorphic bands, and the percentage of polymorphic bands was 76.92%.Genetic similarity coefficients among the forty-five varieties of ginkgo were from 0.53 to 0.93, and the cultivation were divided into four clusters when similarity coefficient was 0.67.

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字典

Key words: Ginkgo biloba；Sequence-related amplified polymorphism；Genetic diversity.

目录

前 言 - 1 -

1 文献综述 - 2 -

1.1 标记育种概况 - 2 -

1.2 分子标记 - 4 -

1.2.1相关序列扩增多态性（SRAP）标记 - 4 -

1.2.2 SRAP技术与主要分子标记技术的比较 - 5 -

2 材料与方法 - 8 -

2.1植物材料 - 8 -

2.2 实验试剂 - 9 -

2.3实验所需设备 - 9 -

2.4 实验方法 - 9 -

2.4.1 DNA的提取 - 9 -

2.4.2 DNA检测 - 10 -

2.4.3 SRAP-PCR反应体系及扩增程序 - 10 -

2.4.4 SRAP-PCR扩增产物的电泳检测 - 10 -

2.4.5 引物的筛选 - 11 -

2.4.6银杏品种PCR扩增及条带的统计和分析 - 11 -

3 结果与分析 - 12 -

3.1 DNA的提取 - 12 -

3.2 SRAP引物的筛选 - 12 -

3.3 SRAP-PCR扩增结果的多态性分析 - 12 -

3.4 45份银杏品种（系）的遗传多样性分析 - 13 -

4 结论与讨论 - 14 -

4.1银杏SRAP标记的扩增多态性及遗传多样性分析 - 14 -

4.2分子标记在银杏上的应用 - 15 -

致谢 - 16 -

参考文献： - 17 -

前 言

银杏是我国古老的树种，素有活化石之称，也是我国特有的树种之一，它本身更是个宝，集材用、食用、药用、观赏于一体，具有很高的经济价值与园林观赏价值。银杏品种繁多，但是没有统一的分类 ，而且仅从外观形态上区分开来却是费时费力。银杏为深根性树种，寿命很长，可达1000年以上。其生长缓慢，但是容易受到外界环境的影响，一般来说，在北京地区20年生的高6-7m；浙江天目山海拔500m处的林木，30年生的高10.6m。银杏发育缓慢，实生繁殖大概要20年才会开始开花结果，40年才会开始进入结实盛期，所以常用的繁殖方式是无性繁殖。由于不同地域间相互进行引种，使得同名异物或是同物异名的现象不胜枚举。而人们对于银杏品种的鉴定和分类是通过标记育种，而标记育种经历了一个漫长的发展过程，从只是单一的形态学标记再到细胞标记、生化标记再到现今流行的分子标记，人们对于植物的研究一直在不断的探索。分子标记已经深入到通过研究遗传物质DNA，从而为区分种质、连锁分析、基因定位、判定亲缘关系远近以及绘制基因图谱等提供有利的证据，作为基于DNA水平上的分子标记相较于其他标记育种，具有无可比拟的优越性，其结果真实可靠、不受外界环境以及内部发育状况的影响。近几年关于SRAP标记在动植物上的运用不胜枚举，比如苹果、鸭茅、番石榴、棉花^[1]、花生^[2]、狗牙根等等,但是关于银杏的研究还未见报道。本研究利用9对SRAP引物对45份银杏栽培品种进行遗传多样性分析，旨在揭示品种间的遗传差异，从而为开展银杏杂交育种提供依据。

1 文献综述

1.1 标记育种概况

标记育种是利用与目标性状基因紧密连锁的遗传标记，对目标性状进行跟踪选择的一项育种技术。遗传标记育种主要分为四种: 形态学标记、细胞学标记、生化标记和分子标记。早期遗传学是从性状表现传递的结果来推断遗传规律，建立遗传定律。在1923年，Sax等提出根据微效基因与主基因紧密连锁，从而对微效基因进行选择。但由于形态学标记数目有限，而且容易受到外界环境的影响，所以应用不广。细胞学标记主要依靠染色体核型和带型，数目有限。同工酶标记在过去一段时间得到了广泛的应用，但是它只能在一定程度上反映DNA组成上的差异和遗传多样性。因为它在基因表达后经过加工修饰，只能反映DNA多态性的一部分，而且它还容易受到外界环境和内部因素的影响。

现将四种标记育种的特性及其应用对比如表1，个中优劣不言自明，实际应用中常多种标记一起参考。