摘 要

青檀DNA的提取是开展一系列后续实验的基本步骤。而DNA的提取效率，尤其是DNA的纯度严重影响实验结果。本研究以青檀的叶片为材料，采用改良的高盐低pH法、改良CTAB法、改良的SDS法和试剂盒法4 种不同方法提取其基因组DNA，并对其进行电泳分析、质量检测及SRAP引物扩增检测。结果表明：改良CTAB 法相比于其余的方法，提取的DNA质量较好，纯度较高，能满足进一步的实验要求。

关键词：青檀；DNA提取方法；DNA纯度

Comparison of Methods in DNA Extraction from

Pteroceltis tatarinowii Maxim.

ABSTRACT

Progress in the extraction and purification of plant genome DNA was reviewed. Advantages and disadvantages of different methods were compared to provide technical references for Pteroceltis tatarinowii Maxim. The main methods include modified CTAB method, high salt and low pH method, modified SDS method and so on. The resulted DNA samples of the methods were tested using UV absorption value, agarose gel electrophoresis, and anthraquinone pigment to compare sugar content, yield and quality of obtained DNA. CTAB was decided as the best method for the test.

Key words：Pteroceltis tatarinowii Maxim.; extraction of DNA; DNA purity

目 录

1 文献综述 …………………………………………………………………………………………………1

1.1植物样品的采集与保存……………………………………………………………1

1.2传统的植物DNA提取原理及方法…………………………………………………1

1.2.1 CTAB法提取植物DNA的原理与步骤 ……………………………………………2

1.2.2 SDS法提取植物DNA原理与步骤 …………………………………………………2

1.3 改良的植物DNA提取方法 ………………………………………………………………………2

1.3.1 改良后的CTAB法提取植物DNA ………………………………………………………2

1.3.2 改良后的SDS法提取植物DNA …………………………………………………………3

1.4 DNA的纯化及杂质去除 ………………………………………………………………………3

1.4.1 除去酚类物质 ……………………………………………………………………3

1.4.2 除去多糖类物质 …………………………………………………………………… 4

1.5 DNA品质检测……………………………………………………………………………………4

1.5.1 DNA 检测方法 …………………………………………………………………………4

1.5.2 多糖浓度测定 …………………………………………………………………… 4

2 研究的意义与现状 ……………………………………………………………………………………5

2.1 研究的意义 ……………………………………………………………………………………5

2.2 研究的现状…………………………………………………………………………………… 5

3 材料与方法 ………………………………………………………………………………………6

3.1 实验材料 ……………………………………………………………………6

3.2 实验仪器 …………………………………………………………………………6

3.3 实验方法 ……………………………………………………………………………………6

3.3.1 改良高盐低pH值法 ………………………………………………………………6

3.3.2 改良的SDS法 ……………………………………………………………………6

3.3.3 改良的CTAB法 ……………………………………………………………………7

3.3.4 试剂盒法 …………………………………………………………………8

3.3.5 基因组DNA的浓度和品质检测………………………………………………………8

3.3.6 SRAP-PCR扩增 ……………………………………………………………………8

4 结果与分析 ……………………………………………………………………………………………10

4.1 基因组DNA浓度和品质检测 …………………………………………………………10

4.2 SRAP-PCR扩增 …………………………………………………………………………13

4.3 小结 ……………………………………………………………………………………… 13

致谢 ………………………………………………………………………………………14

参考文献 …………………………………………………………………………………………15

1 文献综述

植物DNA的提取和纯化是植物基因工程研究的基础操作，所以DNA的提取对我们后续的研究有着重要的指导作用。由于材料的来源部位、形态等外在性质的不同，以及化学成分组织结构等内在特点的差异，常会需要在提取DNA时选择不同的方法或作一些特殊的处理。如有的植物组织含有较多的多糖及酚、酯、萜等次生代谢产物，从而会影响到所提的纯度及随后的实验分析。因而选择一种简单快速而高效提取基因组的方法常常成为实验中关键的一步^[1] 。

目前许多研究者常用SDS(十二烷基硫酸钠)、CTAB(The cetyltrime-thyl ammonium bromide，十六烷基三乙基溴化铵)法及其改良后的方法提取DNA^[2]。通过阅读文献后，对现有的植物DNA提取基本原理进行归纳总结，深入了解DNA提取的方法和步骤，并在此基础上，对现有的方法进行改良，以期得到高纯度的DNA。